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【预防污染】预防活培养物的螨虫污染

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介绍

螨虫常常给真菌的菌种保藏带来麻烦。这些不起眼的酪恙虫属和跗线螨属动物在土壤中天然存在,几乎所有的有机材质和真菌都非常易于受到其感染。它们一般长约0.25毫米,正处在人类视力的极限边缘,看上去呈白色小点状。螨虫常常躲藏在菌丝里面快速繁殖,初期的表征是培养物外观变糟(虫蛀过的样子),随之在未经接种的琼脂上出现蜿蜒的小菌落痕迹。

螨虫带入到实验室的途径有新鲜的植物体,腐烂的发霉物,鞋子,昆虫的躯体甚至其他实验室的培养物。它们适宜于潮湿温暖的环境,所以通常最早出现在欧洲的初夏或新实验室的新设备,潮湿的墙壁和新的木制品上。它们不仅侵蚀培养物同时还在培养物间转移的时候于多毛的躯体上携带真菌的孢子和细菌。

预防

预防总比不得不控制暴发要好。这可以概括为一般卫生和筛选所有进入实验室的培养物和材料以及摧毁或隔离让人头痛的的被虫害侵染的材料。即便如此,最好还是单独的处理、存储和检疫新鲜的材料。因为最初的检测没有查出来的话,轻微染虫的培养物能够发展成严重的侵染。如果需要处理染虫的材料,保藏菌种应该被好好分离。

控制

不同的人员对于控制螨虫有不同的看法。那些处理快速周转的受感染材料的人也许并不认为少量的螨虫是多大的问题,但是对于菌种保藏的人员来说那简直是灾难。最好采取组合的预防方式。这些方式可以分为以下的一些种类:(1)卫生,(2)熏烟消毒,(3)机械和化学屏障(4)保护性存储。

1.   卫生

卫生配合检疫也许是最佳的保护

1.1 所有工作台必须保持清洁。

1.2 培养物应免于空气污染。

1.3 螨虫可能附着于操作者的手部和衣服上。

1.4 狭小的实验室条件和拥挤的培养物增加感染的风险。

1.5 工作台和长凳要用杀螨剂定期清洁。让杀螨剂充分作用(过夜)并清洗,最好用乙醇。由于某些杀螨剂对人体有毒,操作时需佩戴防护手套。

英联邦真菌研究所使用虫螨磷(英国化学工业公司,农用化学品)杀螨虫。其他用于农业和谷物储存的杀螨剂有Murfit,Reldan和毒死蜱以及Satisfar

螨虫有耐药性,所以需要不时改变杀螨剂

1.6 受螨虫感染的培养物应立即处理并尽可能消毒灭菌。直接区域所涉及的所有均要进行检测和分离。

2. 熏烟消毒

培养物可储存在橱柜或箱子里,其内置杀螨剂做预防或短期处理。樟脑和对二氯苯(PDB)曾做此用,但现在由于其毒性取消了。PDB对真菌的生长有影响。在培养插塞上滴加开乐散和Crypo曾是有效的方法,目前流行的安全措施已不再提倡熏烟消毒法。

3. 机械和化学屏障

已经尝试了很多物理方法预防螨虫滋生和蔓延。

3.1 将培养物置于一个平台或托盘上,周围被水,油,凡士林或其他黏着材料环绕。这样造成处理培养物比较麻烦,而且仅能预防爬行螨虫。

3.2 菌种培养时,培养瓶或平板可能要封口,然而需要保证正在生长的菌种自由呼吸。因此封闭同时允许空气透过的方式是比较好的。

1946Snyder Hansen曾采用上置的螺帽或倒置的棉塞(塞得很深)以及灭过菌的卷烟纸和硫酸铜胶(20g明胶,2g硫酸铜,100ml水)来封闭瓶口。纸上的孔洞允许空气透过但却能防止螨虫进入,这样就达到了保证菌种清洁以及隔离害虫的目的。要保证这种密闭方法有效必须操作谨慎。

1971年,Smith建议采用废弃的塑料瓶配上塑料盖,其拧紧的时候仍然允许呼吸但却能排除螨虫。

用各种现代的塑料带密封的培养皿和培养瓶能够减少虫害传播,但是由于裂纹和皱褶的产生,在经历很长一段时间储藏以后螨虫最终能够渗透并接触到菌种。

绷紧的棉塞对于螨虫是一个相当大的阻碍但并不完全有效。有人用氯化汞溶液处理棉塞,这样能杀死螨虫但是其有毒害对操作造成威胁(尽管人造红色色素能够指示其存在)。同时氯化汞对真菌有毒。

4. 保护性存储

在长期菌种保藏中许多方法都能防止虫害感染。

4.1 螨虫不会感染浸泡在矿物油里的菌种。

4.2  4-8℃冷藏会极大地抑制螨虫的运动但却不能将其杀死,因此当培养物从冰箱移出时螨虫将继续增殖。

4.3  -20深度冷冻保藏通常能够杀死现存的任何螨虫。因此在处理受螨虫感染但太有价值而不能丢弃的材料时,可以在清洁以前先深度冷冻处理34天。

4.4 冷冻干燥的安瓿管能够完全防护螨虫。

4.5 超低温储藏菌种,例如液氮,能够提供全面的保护。

4.6 储存在硅胶中的菌种由于玻璃小瓶或瓶子口有螺丝拧紧的帽子,因此也是完全密封。

                                 

                         

REFERENCES

Smith, R.S. (1971). Maintenance of fungal cultures in pre-sterilized disposable screw-cap plastic

tubes. Mycologia 63, 1218-1221.

Smith, R.S. (1978). A new lid closure for fungal culture vessels giving complete protection against

mite infestation and microbiological contamination. Mycologia 70, 499-508.

Snyder, W.C. & Hansen, H.N. (1946). Control of mites by cigarette paper barriers. Mycologia 38,455-562.